Органолептические и лабораторные методы определения мяса от павших, убитых в агональном состоянии, больных животных. Реакция на пероксидазу положительная Реакция на пероксидазу в мясе животных
Сущность реакции заключается в том, что находящийся в мясе фермент пероксидаза разлагает перекись водорода с образованием кислорода, который и окисляет бензидин. При этом образуется парахинондиимид, который с недоокисленным бензидином дает соединение (парахинондиимид) сине-зеленого цвета, переходящего в бурый.
В ходе этой реакции важное значение имеет активность пероксидазы. В мясе здоровых животных она весьма активна, в мясе больных и убитых в агональном состоянии активность ее значительно снижается.
Пероксидаза + бензидин + 2H 2 O 2 + бензидин
парахинондиимид (сине-зеленый цвет, переходящий в буро-коричневый).
Техника определения. В пробирку наливают 2 мл мясной вытяжки в соотношении 1:4 (приготовленная для определения рН колориметрическим способом), приливают 5 капель 0,2%-ного раствора бензидина, взбалтывают и добавляют 2 капли 1%-ного раствора перекиси водорода.
Оценка результатов. При положительной реакции мясная вытяжка через 0,5 - 1,5 минуты приобретает сине-зеленый цвет, который быстро переходит в буро-коричневый. Такая реакция свойственна мясу, полученному от здорового животного.
Слабо положительная реакция (сомнительная). Вытяжка из мяса переутомленных, старых и заболевших животных приобретает сине-зеленый цвет, который с задержкой переходит в буро-коричневый.
Отрицательная реакция. В вытяжке из мяса тяжело больных или убитых в агональном состоянии животных сине-зеленый цвет не появляется, и вытяжка сразу приобретает буро-коричневый оттенок.
6.5 Формольная реакция (по г.В. Колоболотскому и е.В. Киселеву)
При тяжело протекающих заболеваниях, еще при жизни животного, в мышцах в значительном количестве накапливаются промежуточные и конечные продукты белкового обмена – полипептиды, пептиды, аминокислоты и др. Сущность данной реакции заключается в осаждении этих продуктов обмена формальдегидом.
Техника определения. Для постановки реакции необходима водная вытяжка из исследуемого мяса в соотношении 1:1. Для приготовления вытяжки 1:1 пробу мяса освобождают от жира и соединительной ткани и отвешивают 10 г. Затем навеску помещают в ступку, тщательно измельчают изогнутыми ножницами, приливают 10 мл физиологического раствора и 10 капель 0,1 Н раствора едкого натра.
Мясо растирают пестиком. Полученную кашицу переносят с помощью стеклянной палочки в колбу и нагревают до кипения для осаждения белков. Колбу охлаждают холодной водой под краном, после чего, ее содержимое нейтрализуют добавлением пяти капель 5%-ного раствора щавелевой кислоты и пропускают в пробирку через фильтровальную бумагу. Если вытяжка после фильтрации остается мутной, фильтруют вторично или центрифугируют.
Выпускаемый промышленностью формалин имеет кислую среду, поэтому его предварительно нейтрализуют 0,1 Н едким натром по индикатору, состоящему из равной смеси 0,2%-ных водных растворов нейтральрота и метиленового голубого до перехода цвета из фиолетового в зеленый.
Для реакции в пробирку наливают 2 мл вытяжки и добавляют 1 мл нейтрального формалина.
Оценка результатов. Положительная реакция. Вытяжка, полученная из мяса животного, убитого в агонии, тяжело больного или разделанного после падежа, превращается в плотный сгусток.
Сомнительная реакция. В вытяжке из мяса утомленного или заболевшего животного выпадают хлопья.
Отрицательная реакция. Вытяжка из мяса здорового животного остается прозрачной или слабо мутнеет.
Мясо считается полученным от здорового животного при наличии хороших органолептических показателей туши, отсутствии патогенных микробов, рН 5,7 - 6,2, положительной реакции на пероксидазу и отрицательной формольной реакции. Мясо больного, а также переутомленного животного недостаточно обескровлено, рН 6,3 - 6,5 реакция на пероксидазу отрицательная, а формольная проба - положительная (хлопья). Мясо животного, убитого в состоянии агонии, плохо обескровлено, с синюшной или сиреневато-розовой окраской лимфатических узлов, рН 6,6 и выше, реакция на пероксидазу отрицательная, а формольная реакция сопровождается образованием желеобразного сгустка.
Таблица 2 Лабораторные показатели мяса здоровых и больных животных
|
Показатели |
Мясо здоровых животных |
Мясо утомленного и заболевшего животного |
Мясо тяжело больного животного или убитого в агональном состоянии |
|
1.Бактериоскопия мазков-отпечатков |
Микрофлора отсутствует |
Единичные кокки или бактерии |
Имеются кокки, палочки |
|
2. рН мясной вытяжки |
6,6 и выше |
||
|
3. Реакция на пероксидазу |
Положительная (сине-зеленое окрашивание, быстро переходящее в буро-коричневое) |
Сомнительная или слабо положительная (сине-зеленое окрашивание с задержкой, переходящее в буро-коричневое) |
Отрицательная (сине-зеленый цвет не появляется, а вытяжка сразу приобретает буро-коричневый цвет) |
|
4. Формольная проба (для мяса крупного рогатого скота) |
Отрицательная (вытяжка остается прозрачной или слабо мутнеет) |
Сомнительная (выпадают хлопья) |
Положительная (образуется плотный сгусток) |
-острый миелолейкоз
-хронический лимфолейкоз
+недифференцируемый лейкоз
-острый лимфолейкоз
-хронический миелолейкоз
/\173. В патогенезе нарушения коагуляционного механизма гемостаза имеет значение
-уменьшение количества тромбоцитов
-нарушение функции тромбоцитов
-вазопатия
+дефицит фактора VIII
-дефект тромбоцитарных рецепторов IIb-IIIa
/\174. Для тромбоцитопении характерно
-дефицит плазменных факторов свертывания
-удлинение времени свертывания крови
-гематомный тип кровоточивости
+петехиальный тип кровоточивости
-время кровотечения в норме
/\175. Адгезия и агрегация тромбоцитов снижается при
-избытке кальция и магния
-дефиците VIII ф свертывания крови
-повышении в крови концентрации АДФ
-избытке тромбоксана А2
+дефиците фактора Виллебранда
/\176. Наследственный дефицит прокоагулянтов имеет место при
+гемофилиях
-дефиците витамина К
-печеночной недостаточности
-образовании антител к прокоагулянтам
-нарушении карбоксилирования факторов протромбинового комплекса
/\177. Для гемофилии А характерно
-аутосомно-рецессивный тип наследования
-дефицит IX ф свертывания крови
-петехии, экхимозы
+гемартрозы
-удлинение времени кровотечения
/\178. Для болезни Виллебранда характерно
-уменьшение длительности капиллярного кровотечения
-укорочение времени свертывания крови
-повышенная агрегационная способность тромбоцитов
-нарушение синтеза фактора VIII
+снижение прокоагулянтной активности фактора VIII
/\179.В патогенезе гиперкоагуляции при ДВС - синдроме имеет значение
+активацией "внешнего" и "внутреннего" механизмов свертывания крови
-гипофибриногенемия
-активацией фибринолитической системы крови
-избыток антитромбина III
-тромбоцитопатия
/\180. В патогенезе гипокоагуляции при ДВС - синдроме имеет значение
+коагулопатия и тромбоцитопения потребления
-избыток прокоагулянтов
-поступление в кровь большого количества тканевого тромбопластина
-активация ингибиторов фибринолиза
-дефицит антитромбина III
/\181. Наиболее выраженная стадия ДВС-синдрома у новорожденных
+гипокоагуляции
-гиперкоагуляции
-переходная
-восстановления
-терминальная
/\181. К клиническим проявлениям геморрагической болезни новорожденных относятся
+мелена, кровотечение из пупочной ранки
-желтушность кожи и слизистых
-ядерная желтуха
-гипербилирубинемия
-отеки
/\182. При гемофилии А нарушается
+Образование активной протромбиназы
-Переход протромбина в тромбин
-Переход фибриногена в фибрин
-Вторая фаза свертывания крови
-Третья фаза свертывания крови
/\183. Гиперкоагуляция крови наблюдается при
-Избытке протеина С
-Избытке протеина S
-Избытке антитромбина-III
+Резистентности фактора V к протеину С
-афибриногенемии
/\184. Этиологические факторы экзогенного происхождения, вызывающие поражение нервной системы
+алкогольная интоксикация
-повреждение нейронов при печеночной коме
-ишемия мозга
-гипогликемия
-повреждение нейронов при уремии
/\185. По нервным проводникам в нервную систему поступают
-стрептококковый экзотоксин
-менингококки
-пневмококки
-кишечная палочка
+вирус бешенства
/\186. Причина спонгиозной трансмиссивной энцефалопатии
-Цитомегаловирусы
-Энтеровирусы
-Вирусы бешенства
-Вирус герпеса
+Прионы
/\187. Вирусы, которые образуют внутриклеточные включения в нейронах
-Цитомегаловирусы
-Энтеровирусы
+Вирусы бешенства
-Вирус герпеса
-Вирус полимиелита
/\188. Дефицит торможения - это
+выход нижележащих отделов ЦНС из-под контроля вышележащих отделов
-снижение нервных влияний на постсинаптические структуры
/\189. Денервационный синдром - это
-нарушение транспорта трофогенов и образование патотрофогенов
-снижение афферентной импульсации в нейрон
-выход нижележащих отделов ЦНС из-под контроля вышележащих отделов
+снижение нервных влияний на постсинаптические структуры
-группа гиперактивных нейронов
/\190. Первичный дефицит торможения развивается вследствие
-чрезмерной стимуляции нервной системы
+нарушения структуры и функции тормозных нейронов
-повышения синтеза возбуждающих медиаторов
/\191. Вторичный дефицит торможения развивается вследствие
+действия деполяризующих агентов возбуждающих аминокислот, приводящих к чрезмерной активности нейронов
-нарушения структуры и функции тормозных нейронов
-нарушения структуры и функции возбуждающих синапсов
-снижения синтеза возбуждающих медиаторов
-избытка нисходящих тормозных влияний при разрушении участков нервной системы
/\192. Последствием синдрома растормаживания может быть
-развитие дистрофических изменений в нейронах и иннервируемых структурах
+образование ГПУВ (генератора патологически усиленного возбуждения)
-развитие синдрома денервации
-развитие атрофии органа
-развитие синдрома деафферентации
/\193. Генератор патологически усиленного возбуждения (ГПУВ) – это
+агрегат гиперактивных взаимодействующих нейронов, продуцирующих неконтролируемый поток импульсов
-совокупность каскадных мембранных и внутриклеточных процессов
-комплекс изменений в синаптических структурах
-нарушение трофики, обусловленное выпадением или изменением нервных влияний
Комплекс изменений, возникающих в постсинаптических нейронах, органах и тканях после выпадения нервных влияний на эти структуры
/\194. Значение образования ГПУВ
-способствует образованию разлитого торможения
+является детерминантой патологической системы и способствует образованию патологической системы
-способствует образованию физиологической системы
-усиливает трофическое влияние нейрона на иннервируемые структуры
-тормозит развитие нейропатологических процессов
/\195. К медленным гиперкинезам относится
-судороги
+атетоз
-тики
-хорея
-тремор
/\196. Неврозы могут привести к развитию
+язвенной болезни двенадцатиперстной кишки
-менингита
-спонгиозной трансмиссивной энцефалопатии
-энцефалита
-болезни Альцгеймера
/\197. Для центральных параличей характерно:
-сохранение произвольных движений
-ослабление сухожильных рефлексов
+усиление сухожильных рефлексов
-отсутствие патологических рефлексов
-понижение тонуса мышц
/\198. Для периферических параличей характерно
-усиление спинальных рефлексов
-появление патологических рефлексов
-гипертрофия мышц
+мышечная гипотония
-гипертонус мышц
/\203. К медиаторам боли относится
-физиологические концентрации адреналина
-энкефалины
-эндорфины
+брадикинин
-динорфин
/\204.Ощущение боли формируется в
-ноцицепторах
-нервных стволах
-спинном мозге
-ретикулярной формации
+нейронах таламуса и коры больших полушарий
/\205. Наиболее восприимчивы к боли
+кожа и слизистые
-печень
-головной мозг
-спинной мозг
-миокард
/\206. Фантомная боль – это боль
-в левой руке и левой лопатке при приступе стенокардии
-над ключицей при остром гепатите или раздражении париетальной брюшины
-при заболеваниях головного мозга
+в отсутсвующей части тела, чаще всего после ампутации конечностей
-опоясывающая боль при панкреатите
/\207.В патогенезе фантомной боли имеют важное значение
-повышение чувствительности ноцицепторов
-увеличение проводимости нервных стволов
-повышение возбудимости коры головного мозга
Образование ампутационной невромы и формирование генератора патологически усиленного возбуждения в спинном мозге
-угнетение возбудимости ствола мозга
/\208.К антиноцицептивной системе относится
-брадикинин
+желатинозная субстанция
-ионы Н, К
-гистамин
-субстанция Р
/\209.Снижение болевой чувствительности при растирании кожи и массаже обусловлено
-снижением чувствительности ноцицепторов
-блокадой нервных проводников
-снижением возбудимости нейронов ретикулярной формации
-угнетением возбудимости нейронов таламуса
+активацией желатинозной субстанции спинного мозга
/\211. Ведущим звеном патогенеза диабетической гиперосмоляльной комы является
+гипергликемия
-кетоз
-лактатацидемия
-гипоксия
-гиперазотемия
/\212. Причиной ишемического инсульта может быть
+тромбоз или эмболия сосудов мозга
-разрыв аневризмы сосудов мозга
-дистония сосудов мозга
-артериальная гиперемия мозга
-снижение свертываемости крови
/\213. Причиной геморрагического инсульта может быть
+артериальная гипертензия
-стенозирующий атеросклероз сосудов мозга
-тромбоз и эмболия сосудов мозга
-ангиоспазм сосудов мозга
-повышение гематокрита
/\214. При ишемическом инсульте в отличие от геморрагического в клинической картине чаще преобладает
-Отек мозга
+Очаговая симптоматика
-Кровь в спинномозговой жидкости
-Сдавление ткани мозга
-Повышение внутричерепного давления
/\215. Мозжечковая атаксия, расстройства памяти на текущие события, нистагм, дизартрия, дисфагия, икота, головокружение характерны для повреждения
+Позвоночной артерии (задняя нижняя мозжечковая артерия)
-Передней мозговой артерии
-Средней мозговой артерии
-Задней мозговой артерий
-Пиальных артерий
/\216. Парез или спастический паралич конечностей (проксимального отдела руки и дистального отдела ноги), потеря чувствительности на противоположной поражению стороне наблюдается при повреждении
-Позвоночной артерии (задняя нижняя мозжечковая артерия)
+Передней мозговой артерии
-Средней мозговой артерии
-Задней мозговой артерии
-Пиальных артерий
/\217. У больного М., 64 лет, диагноз «ишемический инсульт», выявлено: положительный рефлекс «Бабинского» слева, потеря чувствительности на левой стороне тела.
В присутствии перекиси водорода и пероксидазы бензидин образует более сложное соединение из двух молекул, окрашенное в синий цвет. Оно постепенно разлагается с образованием бурого вещества.
Недостатком бензидиновой реакции является ее диффузность. Для ее устранения к реактиву добавляют молибденовокислый аммоний, который осаждает окрашенное вещество.
Реактивы
1) 0,85%-ный раствор поваренной соли.
2) 0,1%-ный раствор молибденовокислого аммония на солевом растворе.
3) Насыщенный раствор бензидина в солевом растворе.
4) 20%-ный раствор перекиси водорода.
5) Смесь перекиси водорода с бензидином из расчета 1 капля перекиси водорода на 2 мл бензидина (смешать перед употреблением).
Проведение реакции
1. Поместить срезы в 0,85%-ный раствор поваренной соли при 4° С в часовом стекле на 3 мин.
2. Обработать срезы раствором 0,1%-ного молибденовокислого аммония в солевом растворе в течение 5 мин.
3. Обработать срезы раствором бензидина, смешанного перед употреблением с перекисью водорода, в течение 5 мин (до появления синей окраски).
4. Промыть срезы свежим охлажденным солевым раствором.
5. Наблюдать локализацию синей окраски.
Результаты реакции (табл. 28, 29)
В листе капусты в местах скопления активной пероксидазы выпадают синие кристаллы. Реакция идет во всех тканях листа с заметной интенсивностью, причем более или менее равномерно во всей паренхиме. В пучках особенно интенсивно красится флоэмная часть. Камбий окрашивается значительно слабее. Обилие пероксидазы во флоэме, по-видимому, объясняется тем, что пластические вещества, передвигающиеся по клеткам, подвергаются частичному окислению и расходуются на синтез веществ новых клеток, образуемых камбием.
В зерновке кукурузы реакция протекает с незначительной интенсивностью. В зародыше окраска почти такая же слабая, как и в эндосперме. Более интенсивная окраска характеризует проводящие элементы. Окраска цитоплазмы клеток, дающих реакцию, неравномерна, пластиды окрашиваются значительно сильнее, чем цитоплазма.
Органолептические методы предусматривают определение: внешнего вида и цвета; состояния мышц на разрезе; консистенции; запаха; прозрачности и аромата бульона.
Каждый отобранный образе и анализируют отдельно.
Аппаратура и материалы
- · Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104--2001 4 с наибольшим пределом взвешивания 200 г, допускаемая погрешность 20 мг.
- · Скальпель медицинский по ГОСТ 21240--89.
- · Пинцет медицинский по ГОСТ 21241--89.
- · Мясорубка бытовая по ГОСТ 4025--95 или электромясорубка бытовая по ГОСТ 20469--95. Колба коническая Кн-100 по ГОСТ 25336--82.
- · Баня водяная электрическая
- · Ножницы медицинские по ГОСТ 21239--93.
- · Нож.
- · Воронки по ГОСТ 25336--82, тип ВФ
- · Цилиндры мерные по ГОСТ 1770--74. вместимостью 25, 100 см 3 .
- · Стаканы по ГОСТ 25336--82, тип В или Н. вместимостью 50 см-".
- · Стекло часовое.
- · Палочки стеклянные.
- · Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026--76.
- · Марля бытовая по ГОСТ 11109-90.
- · Вода дистиллированная по ГОСТ 6709--72.
Определение внешнего вида и нвста поверхности тушки, покровной и внутренней жировой ткани и брюшной серозной оболочки проводят путем внешнего осмотра.
Определение состояния мышц на разрезе
Бедренные мышцы разрезают поперек мышечных волокон. Для определения атажностн мышц фильгровальную бумагу прикладывают к поверхности мышечного разреза на 2 с.
Дня определения липкости мышц прикасаются пальцем к поверхности мышечного среза. Цвет мышц определяют визуально при дневном рассеянном свете.
Определение консистенции
На поверхности тушки кролика в области бедренных мышц легким образуют ямку и следят за временем ее выравнивания.
Определение запаха
Подготовка к испытанию
Для определения запаха жира берут внутреннюю жировую ткань от каждого образца не менее 20 г. Каждую пробу измельчают ножницами, вытапливают в химических стаканах на водяной бане и охлаждают до температуры 20 1 С.
На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53228--2(ГОСТ 20235.0-74 С. 3)
Проведение испытания
Запах внутреннего жира определяют органолептически при помешивании его чистой стеклянной палочкой.
Запах поверхности тушки и брюшной полости определяют органолептически.
Для определения запаха глубинных слоев чистым ножом делают разрез мыши. Особое внимание обращают на запах слоев мышечной ткани, прилегающих к костям.
Определение прозрачности и аромата бульона
Подготовка к анализу
От каждого образца (тушки) вырезают скальпелем куски мышц массой по 25 г из области бедра, лопатки, спины, зареза и дважды измельчают их на мясорубке.
Фарш тщательно перемешивают и берут навеску.
Для приготовления мясного бульона взвешивают 20 г фарша на лабораторных весах, помещают в коническую колбу вместимостью 100 см- и заливают 60 см 3 дистиллированной поды. Содержимое колбы тщательно перемешивают. Колбу закрывают часовым стеклом и ставят на кипящую водяную баню на 10 мин.
Проведение анализа
Запах мясного бульона определяют в процессе нагревания до 80 "С -- 85 "С в момент появления паров, выходящих из приоткрытой колбы, путем ощущения их аромата. Прозрачность бульона устанавливают визуально путем осмотра 20 см 3 бульона, налитого в мерный цилиндр вместимостью 25 см 3 и диаметром 20 мм.
Органолептический метод
Мясо кролика (домашний) весом 2 кг хорошее, кровоподтеков не наблюдалось, без посторонних запохов, без кровяных сгустков, без пятен от желчи. Запах свойственный данному виду мяса, цвет бело розовый. Бульен получился прозрачный, без характерного запаха из чего следует, что мясо свежее.
Реакция на пероксидазу
Сущность реакции заключается в том, что перекись водорода в присутствии фермента пероксидазы окисляет бензидин, образуя при этом парахинондиимид, который с недоокисленным бензидином дает соединение сине-зеленого цвета, переходящего в бурый (цветная реакция). Активность пероксидазы, как и всякого фермента зависит от рН среды. В пробирку наливают 2 мл фильтрата вытяжки(1:4), добавляют 5 капель0,2%-ного спиртового раствора бензидина, содержимое взбалтывают, после чего добавляют2 капли1%-ного раствора перекиси водорода. Реакцию читают в течение1-2 минут.
Вытяжка сначало преобрела сине-зеленый цвет, потом в течении 1-2 минут переходила в буро-коричневый проведение данного анализа говорит о том что мясо свежее.
